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来源：   作者：   发布时间：2020-05-27 03:05:08

花青素提取

• 黑枸杞花青素的提取

      目前花青素的提取方法主要有：有机溶剂提取、超声波辅助提取、微波辅助提取、超临界流体萃取和酶辅助法提取等。用正交实验或响应面可对提取工艺进行优化。正交实验所需的实验次数少，数据点分布均匀。本实验以体积分数70%酸性乙醇为提取液，采用超声波辅助法提取黑枸杞中的花青素，采用响应面法优化提取工艺。

 

将成熟的黑果枸杞及时用自来水洗净，去除黑枸杞根部，再用毛巾擦干，装入干净玻璃皿中，采用真空干燥机避光烘干；用高速粉碎机粉碎干燥的黑枸杞，过60目筛得到黑枸杞粉末，收集后放置在具塞广口瓶中密封避光保存。

在室温和避光条件下取一定量黑果枸杞粉末，精密称定，加入含0.1%HCl的70%乙醇水溶液，在45℃ 下以192.5W的超声波功率超声处理26.1min，再高速离心，过滤，取上清液，再重复两次，合并三次提取的上清液，减压浓缩除去乙醇，冷冻干燥，置于4℃冰箱保存备用。临用前加适量水全部溶解得黑枸杞花青素粗提液。

步骤简图

 

• 黑枸杞花青素的分离纯化

经过提取的花青素粗品中往往含有很多杂质，产品质量稳定性差，纯度不高，为了提高产品的色价和稳定性，需要对提取物进一步纯化。在实验中常用到的方法有柱层析法、大孔树脂层析、膜分离法等等。其中大孔树脂层析是我们所采取的纯化方式。

大孔树脂是近代发展起来的一类有机高聚物吸附剂分离工艺得到的提取物不吸潮，工艺简单，成本相对较低，数据可反复使用，适合工业化生产。各项实验数据也表明大孔树脂吸附纯化。工艺简单，成本低，产率高，安全适用。依据不同的黑枸杞品种，采取适宜的大孔树脂对于黑枸杞花青素进行纯化。得到HPD100大孔树脂对于该实验所选品种黑枸杞花青素有良好的纯化性能。

 

大孔树脂的预处理  将10gHPD100大孔树脂放置烧杯中，用100ml无水乙醇浸泡大孔树脂 24h后，无水乙醇反复洗涤至乙醇液与等体积的水混合不产生白色浑浊时，用水洗至无醇味；再5%NaOH浸泡大孔树脂12h后，水洗至中性；最后用5%HCL 浸泡大孔树脂 12 h 后，水洗至中性，备用。

大孔树脂静态吸附、解吸实验  加入 30 mL 黑枸杞花青素粗提取液，密封避光，放入摇床，室温下150 r/min，每隔4h从上清液中取一次样，采取HPLC法测定花青素含量。待树脂充分吸附花青素后将其过滤，注入蒸馏水冲洗后滤干，置于250ml锥形瓶中，注入70%的0.5 %三氯乙酸-甲醇溶液200ml，密封避光放入摇床中，室温下150r/min振荡，每一小时从上清液中取一次样。

大孔树脂动态吸附、解吸实验  准确称取30.0g经过静态吸附与解吸实验筛选出的树脂，预处理后湿法装入1.6x40cm的层析柱中，平衡后加入一定量的黑枸杞花青素粗提液直至饱和，然后用0.5%三氯乙酸-甲醇溶液进行洗脱，用部分自动收集器分段收集洗脱液。

黑枸杞花青素单体制备  将纯化黑枸杞花青素主要组分在38°C下真空浓缩除去甲醇后，冷冻干燥除去样品中剩余的水分。采用制备型高效液相色谱对花青素组分进行进一步分离纯化，得到黑枸杞花青素单体。